1 基本要求
(1) 掌握細胞培養(yǎng)概念、細胞培養(yǎng)箱分類、基本原理和基本結(jié)構(gòu)。 (2) 熟悉細胞培養(yǎng)技術(shù)。
(3) 了解細胞培養(yǎng)箱常見故障處理及儀器的進展。
2 重點難點
(1) 細胞培養(yǎng)概念、細胞培養(yǎng)技術(shù)。
(2) 細胞培養(yǎng)箱分類、基本原理、基本結(jié)構(gòu)和使用方法。
3 講授學時
建議4學時
4 內(nèi)容提要
4.1 概述
4.1.1 培養(yǎng)細胞的類型及其特點
分為貼附型和懸浮型兩大類。具有接觸抑制和密度抑制的特性。 4.1.2 培養(yǎng)細胞的增殖過程
傳代（passage 或subculture）。從體內(nèi)取出細胞接種培養(yǎng)到**次傳代叫原代培養(yǎng)，原代細胞一經(jīng)傳代后便稱為細胞系（cell line）。 4.1.3 培養(yǎng)細胞的環(huán)境
培養(yǎng)細胞需要特定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設備。培養(yǎng)細胞在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中生長，浸浴于培養(yǎng)液，并需要的環(huán)境，包括一定的溫度、濕度和氣體成分。
4.2細胞培養(yǎng)的技術(shù)
4.2.1 細胞分離和原代（初代）培養(yǎng)
（1）細胞懸液的制備 (2) 原代培養(yǎng) (3)標本接種 4.2.2 培養(yǎng)細胞的傳代 (1)次代細胞培養(yǎng) (2)傳代
4.3細胞培養(yǎng)微生物污染的檢測
4.3.1 霉菌和細菌污染 霉菌和細菌污染較易發(fā)現(xiàn)，細胞生長停止并有中毒表現(xiàn)。
4.3.2 支原體污染 支原體污染是一個常見而又棘手的問題，它可致細胞增殖緩慢，甚**從培養(yǎng)器皿脫落。用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst 33258使支原體DNA著色，置熒光顯微鏡下觀察，可見散在于細胞周圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點為支原體污染.
4.4 細胞培養(yǎng)技術(shù)的應用
4.4.1 細胞融合 細胞融合**典型的應用是單克隆抗體技術(shù)。 4.4.2 核移植 4.4.3 基因轉(zhuǎn)移
4.4.4 細胞治療與組織工程
4.5. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.5.1 電熱恒溫培養(yǎng)箱結(jié)構(gòu)和原理
4.5.2 電熱恒溫培養(yǎng)箱使用注意事項 **重要的是隔水層的加水和智能控溫儀的溫度設定
4.6二氧化碳培養(yǎng)箱
4.6.1 據(jù)其工作原理 CO2培養(yǎng)箱可以分為氣套式CO2培養(yǎng)箱、水套式CO2培養(yǎng)箱、紅外CO2培養(yǎng)箱、高溫滅菌培養(yǎng)箱、濕度可控大溫度范圍培養(yǎng)箱、大容量培養(yǎng)箱等。
4.6.2 CO2培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)特點和使用 結(jié)構(gòu)核心部分主要是CO2調(diào)節(jié)器、溫度調(diào)節(jié)器和濕度調(diào)節(jié)裝置 4.6.3 CO2培養(yǎng)箱的進展
4.7厭氧培養(yǎng)箱
4.7.1 厭氧培養(yǎng)箱的厭氧狀態(tài)產(chǎn)生 厭氧培養(yǎng)箱是通過催化除氧系統(tǒng)和自動連續(xù)循環(huán)換氣系統(tǒng)保持箱內(nèi)的厭氧狀態(tài)。
4.7.2 厭氧培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)與使用 由手套操作箱和傳遞箱兩個部分組成，操作箱內(nèi)還附有小型恒溫培養(yǎng)箱。
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