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制備色譜柱的維護(hù)方法

The maintenance of the preparation of chromatographic column

一、建議使用保護(hù)柱，避免顆粒進(jìn)入色譜柱，引起堵塞；

二、建議選擇合適pH范圍的色譜柱，避免填料溶劑老化；

三、緩沖鹽的正確使用：

緩沖鹽通常使用不當(dāng)會析出，堵塞篩板和填料，使填料板結(jié)，柱壓升高，阻礙基質(zhì)上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩沖鹽析出后很難去除，因此正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要，具體方法如下：

“使用前過渡，使用后沖洗！”

1）等度條件：制備前后用過渡流動相沖洗柱體積不少于20-30個柱體積，或制備完成后用過渡流動相以1.0mL/min（根據(jù)柱規(guī)格調(diào)整）沖洗過夜；

2）梯度條件：制備前，用與初始流動相組成相同的流動相以工作流速沖洗色譜柱不少于20-30個柱體積，制備后，用該過渡流動相沖洗色譜柱不少于20-30個柱體積，且梯度盡量平緩，避免緩沖鹽析出；

3）過渡流動相：有機(jī)相和水相的比例和分析流動相中兩相比例一致，或者水相比例高于分析流動相，*不含緩沖鹽；

四、避免強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱保留：

強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱中的累積是一個緩慢的過程，引起峰變寬和拖尾，使柱效下降，保留時間變化，柱壓長高；對復(fù)雜樣品很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要預(yù)防這一切的方式，堅持每天分析完成后用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上。

清洗方法：

1）未使用緩沖鹽，每天使用完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上；

2）使用緩沖鹽，用上述方法去除緩沖鹽后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上；

3）補(bǔ)救方法：水→乙腈→異丙醇（或氯坊）→乙腈→水，每一步需要沖洗不少于30個柱體積。

注意：不要輕易打開柱頭，因為柱頭一旦打開，很難恢復(fù)到新柱的水平，因為柱頭打開而造成的檢測后果，客戶自行負(fù)責(zé)。