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樣品溶劑的選擇是實驗中不可忽視且很重要的部分，一方面靠經(jīng)驗，一方面還要考慮到所產(chǎn)生的溶劑效應(yīng)。溶劑效應(yīng)是什么？舉個的例子，很多時候，此效應(yīng)可以導(dǎo)致峰形變差。而樣品溶液的組成與進(jìn)樣體積都對會導(dǎo)致溶劑效應(yīng)。如何避免產(chǎn)生的樣品溶劑效應(yīng)？在HPLC分析中樣品溶劑的選擇和流動相是怎樣的聯(lián)系？GCMS、紫外檢測都分別有哪些溶劑選擇經(jīng)驗？本文告訴你!

樣品溶劑的選擇要求，先粗略的概括一下：1、能夠溶解待測物質(zhì)；2、不影響待測物質(zhì)檢測；3、能夠在一定時間范圍內(nèi)保持待測物質(zhì)穩(wěn)定。

什么是溶劑效應(yīng)？

上圖中，色譜圖上較早洗脫的峰扭曲變形或者開叉，與此同時較晚洗脫的峰則較為尖銳與對稱，這些現(xiàn)象顯示一個比較特殊的起因――樣品溶液的溶劑很可能強于流動相。此種強溶劑效應(yīng)的例子在左圖中可見。此處的樣 品溶液的溶劑是100％乙腈（100％的強溶劑），而流動相的組成則較弱，18％的乙腈與72％的水。個峰是開叉的，并且與第二個峰相比，明顯地變寬 了。當(dāng)樣品溶液的溶劑變成流動相時，所有的峰形都改善了，且變得尖銳。見右圖。

為什么呢？這是因為當(dāng)樣品進(jìn)樣時,有可能出現(xiàn)峰展寬,的樣品溶液組成和體積將會保持在10%甚至更低,在這個例子里,當(dāng)樣品溶劑與流動相溶劑強度不同時,換句話來說,也就是樣品未用流動相溶解,因此,有些樣品分子溶解在強溶劑中,并隨強溶劑流過柱子,而有些則溶解在流動相中,從而導(dǎo)致峰分叉。

當(dāng)樣品與流動相強度相差較小,進(jìn)樣影響也會小, 個峰可能會寬于第二個峰,而當(dāng)這種展寬導(dǎo)致必要的分離度降低時,這樣情況應(yīng)引起注意,在左圖中,使用一根短柱,和5μL進(jìn)樣,這與進(jìn)樣體積4μL相 近,用了極性更強的溶劑導(dǎo)致分離度明顯的降低,從2.1降到1.5(如右圖,分離度為2或更大是評估一個完善方法的一個必要參數(shù),也是每天方法的驗證參 數(shù),1.5只是一個基本的分離度,任何一個方法或一根柱子都必需滿足這個條件,當(dāng)進(jìn)樣為一倍時,也就是10μL時,分離度更一步降低,此方法就不行了。

HPLC溶劑的要求

溶劑的極性要與待測樣品相匹配，如果溶解度欠佳，樣品會在柱頭沉淀，不但影響純化分離，且會使柱子惡化。

HPLC溶劑關(guān)鍵性能 

反相液相色譜 

HPLC里面的溶劑效應(yīng)是如何產(chǎn)生的，該如何避免？如何判斷分叉的峰是否由溶劑效應(yīng)造成，就是通過HPLC儀器比對一下兩個劈叉峰的紫外吸收波譜，看看他們是否能一樣的µV特征吸收，第二將進(jìn)樣體積調(diào)節(jié)到0.1µl看看，峰是否好轉(zhuǎn)，如果滿足上面兩個條件幾乎就可以肯定是99%的溶劑效應(yīng)。產(chǎn)生原因:1，樣品溶液的溶劑很可能強于流動相。例如樣品溶液的溶劑是100％乙腈（100％的強溶劑），而流動相的組成則較弱，18％的乙腈與72％的水；產(chǎn)生原因2，就是進(jìn)樣量比較大；產(chǎn)生原因3，樣品的pH值與HPLC流動相pH懸殊，比如酸性流動相體系，樣品pH偏堿性（pH=10）,這種情況下也很有可能發(fā)生 其實上面三個原因歸結(jié)起來就是一個原因，那就是樣品的溶劑與流動相存在一些不一樣，當(dāng)樣品進(jìn)入流動相的時候，由于這種巨大的差異，一部分樣品溶解進(jìn)入了流動相，一部分還留在進(jìn)樣的溶劑里面，所以在HPLC上出現(xiàn)了保留的差異，所以要解決這個問題的方案就是，使用流動相的起始梯度溶解樣品，如果由于溶解度的問題，不得不改用其余的溶劑，那就只能降低進(jìn)樣體積來解決，比如 5µl，1µL。

GC-MS 測定PAHs，HP-5MS (Agilent) 柱，固相萃取后使用甲醇洗脫。用甲醇做溶劑，是否會影響柱效和柱壽命。是否是？甲醇的沸點比較高，極性比較大，如果換成正己烷類的弱極性，低沸點，配合一定的色譜條件可以實現(xiàn)溶劑聚焦作用，顯著提高保留時間較短的化合物的靈敏度和檢出線。甲醇相對于正己烷等極性小的溶劑，造成的柱流失大，國外用乙腈做GC-MS溶劑的文獻(xiàn)很多，很多用來減少前面溶劑轉(zhuǎn)換步驟，結(jié)合大體積進(jìn)樣等，溶劑先揮發(fā)分流走掉，從而進(jìn)入柱子乙腈溶劑的較少，可認(rèn)為對柱子影響不大，同時甲醇乙腈對比，乙腈的柱流失要少。

現(xiàn)有個樣品，其結(jié)構(gòu)中只有孤立的C=O。由于樣品溶于乙醇，所以次做紫外掃描時就以乙醇作為溶劑。結(jié)果在202nm處測得了吸收。檢測該化合物的HPLC條件是以乙腈－水作為流動相的。我用流動相作為溶劑再對該化合物進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果在197nm處測得了吸收。而在200～400nm范圍內(nèi)僅在285nm處測得一很小的吸收峰。在做紫外掃描時，樣品溶劑不同，測得的樣品的吸收波長也會不同。如果用HPLC-UV檢測該化合物，波長選為202nm（以乙醇作為溶劑測得的），是否合適呢？在做HPLC檢測時，樣品的溶劑如果不是流動相之一，會不會影響檢測結(jié)果呢？C=O在270～300nm有較弱的紫外吸收（ε=10～100），285nm的峰應(yīng)為C=O的吸收。乙腈-水的極性強于乙醇，由于N-π躍遷的存在，將發(fā)生藍(lán)移（吸收202變?yōu)?97），在紫外區(qū)的邊緣測定有關(guān)物質(zhì)則干擾甚大，不合適；測定含量勉強可以，如果僅測定含量可以根據(jù)吸收情況適當(dāng)增加到210nm左右。如果溶劑跟流動相一樣，那紫外吸收也應(yīng)該一致，否則樣品就非同一物質(zhì)。紫外測定選擇吸收波長進(jìn)行含量測定，可以提高檢測靈敏度，減少

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