常見的色譜法主要有:柱色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法、超臨界流體色譜法。
(1)柱色譜法:最原始的色譜方法,該方法將固定相注入下端塞有棉花或濾紙的玻璃管中,將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端,以流動相洗脫。常見的洗脫方式有兩種:一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫,另一種:自下而上依靠毛細作用洗脫。收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法:一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液,另一種方法是烘干固定相后用機械方法分開各個色帶,以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。柱色譜法被廣泛應用于混合物的分離,包括:對有機合成產物、天然提取物以及生物大分子的分離。
(2)薄層色譜法:應用非常廣泛的色譜方法,這種色譜方法將固定相涂布在金屬或玻璃薄板上形成薄層,用毛細管、鋼筆或者其他工具將樣品點于薄板一端,之后將點樣端浸入流動相中,依靠毛細作用令流動相溶劑沿薄板上行展開樣品。薄層色譜法成本低廉、操作簡單,被用于對樣品的粗測、對有機合成反應進程的檢測等用途。
(3)高效液相色譜法(HPLC):目前,應用最多的色譜分析方法,高效液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液瓶、、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是,針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC要求輸液量穩(wěn)定平衡;進樣系統(tǒng)要求進樣便利、切換嚴密;由于液體流動相黏度遠遠小于氣體,為了減低柱壓,高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個領域。高效液相色譜法依據溶質(樣品)在固定相和流動相中分離過程的物理化學原理可以分為以下幾種:① 吸附色譜:用固定吸附劑做固定相,以不同極性溶劑做流動相,依據樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實現分離。② 分配色譜③ 親水作用色譜④ 疏水作用色譜⑤ 離子色譜⑥ 體積排阻色譜⑦ 親和色譜。
(4)氣相色譜法
(5)超臨界流體色譜