PCR儀是用于擴(kuò)增基因組DNA的常用科學(xué)工具，由于其特異性和敏感性，在實(shí)驗(yàn)室中使用不同類型的PCR，用于定性和定量測(cè)試，PCR步驟涉及去成熟，退火和延伸，使用引物，Taq聚合酶和核苷酸。
1、巢式PCR
巢式PCR是聚合酶鏈反應(yīng)的改進(jìn)，旨在提高特異性，它減少了產(chǎn)品的非特異性結(jié)合，巢式PCR使用兩組引物。一種用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的反應(yīng)，第二次用于次反應(yīng)的產(chǎn)物中以擴(kuò)增目的。在巢式PCR的步中，通過(guò)使用組引物擴(kuò)增靶DNA。步的產(chǎn)物通過(guò)第二組引物擴(kuò)增。兩次設(shè)定的引物是步產(chǎn)物的互補(bǔ)。使用兩組PCR引物的目的是減少產(chǎn)物的污染并改善其特異性。
2、定量PCR
定量PCR也稱為實(shí)時(shí)PCR，是高度敏感和可重現(xiàn)的技術(shù)，該技術(shù)可以定量和半定量使用。這是PCR儀所涉及的基本原理，PCR儀是一種與PCR相關(guān)的儀器，有助于PCR反應(yīng)，常用的檢測(cè)方法是使用DNA插入的熒光染料，這是一個(gè)實(shí)驗(yàn)室過(guò)程。該過(guò)程包括定量擴(kuò)增。定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括快速檢測(cè)HCV，HBV等病毒感染
，高度敏感，可重復(fù)，減少污染，給定量結(jié)果，是軟件驅(qū)動(dòng)的操作。
3、多重PCR
在PCR的單個(gè)步驟中擴(kuò)增幾個(gè)基因組DNA序列，多個(gè)引物和DNA聚合酶與PCR儀一起使用，。該P(yáng)CR用于在單一反應(yīng)中檢測(cè)不同的病原體。對(duì)于多重PCR，引物的設(shè)計(jì)是不同的。為了擴(kuò)增DNA模板的特定序列，單模板PCR使用具有多個(gè)正向和反向引物的單一模板。多模板PCR可以在單個(gè)反應(yīng)中使用多個(gè)模板和幾個(gè)正向和反向引物。用于多重PCR設(shè)計(jì)的引物，長(zhǎng)度約為18-22個(gè)堿基對(duì)。多重PCR的優(yōu)點(diǎn)包括比其他PCR高效，擴(kuò)增子提供內(nèi)部控制，逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄酶PCR用于從RNA合成cDNA。
4、逆轉(zhuǎn)錄酶PCR原理
步使用逆轉(zhuǎn)錄酶從RNA形成cDNA，在下一步中使用PCR擴(kuò)增cDNA。并且單鏈cDNA轉(zhuǎn)化為雙鏈DNA，整個(gè)過(guò)程的要點(diǎn)是mRNA的純化。在單步法中，cDNA的轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增在單個(gè)反應(yīng)管中發(fā)生，并且在2步法中cDNA和擴(kuò)增在不同的管中進(jìn)行，2步法比單步法更方便。提取RNA，將提取的物質(zhì)加入反應(yīng)混合物中，如果存在靶標(biāo)，引物用于使RNA鏈退火，逆轉(zhuǎn)錄酶將mRNA轉(zhuǎn)化為cDNA，引物延伸該鏈，溫度保持90度，降低溫度以使新形成的cDNA退火，新DNA由聚合酶合成，許多副本由多個(gè)循環(huán)形成。
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