屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室建設要求
（一）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室實驗室布局
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室物理分區(qū)為檢測區(qū)和消毒區(qū)。
1、檢測區(qū)：應進一步分為樣品處理區(qū)、配液區(qū)、擴增區(qū)，嚴格分區(qū)操作。應配置的儀器設備及耗材有：組織破碎儀（均質器/勻漿儀）、普通離心機、渦旋振蕩器、移液器及其配套吸頭（樣品處理區(qū)和配液區(qū)各一套移液器，不能混用）。此外，需配備冰箱至少1臺（存放檢測試劑、檢測樣品、滅菌后廢棄物）、儲物柜（存放EP管、PCR管、槍頭等耗材）、垃圾桶2個（1個配備黑色垃圾袋，用于盛放普通垃圾；另1個配備黃色廢棄物專用垃圾袋，用于盛放廢棄物）。
2、消毒區(qū)：主要用于廢棄物處理，應配備高壓滅菌鍋、純水儀、高壓滅菌袋、高壓滅菌指示條。
（二）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室儀器設備及耗材
1、屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室儀器設備：組織破碎儀（均質器/勻漿儀）、普通離心機、渦旋振蕩器、熒光PCR儀、高壓滅菌鍋、冷藏冷凍冰箱、移液器（量程為10ul、200ul、1ml）及配套吸頭。
2、實驗耗材：（或注射器）、真空采血管（EDTA抗凝劑）、1.5mLEP管及其管架、PCR八聯(lián)管（與熒光PCR儀配套）及其管架、剪刀、鑷子等。
3、檢測試劑：應使用批準或經中國動物疫病預防控制中心比對符合要求的檢測方法及檢測試劑盒開展檢測。
4、個人防護用品：實驗服、一次性乳膠手套、一次性口罩、一次性鞋套。
序號 儀器設備名稱 規(guī)格型號要求 數量 用途 1 常量天平 感量 0.01g ≥1 常規(guī)稱量， 2 精密天平 感量 0.1mg ≥1 精密稱量、標準物質稱量， 3 酶標儀 JN-MBY96 ≥1 快速篩查檢測，波長可調 4 pH 計 JN-PH ≥1 酸度測定，精度±0.01 5 冷藏設備 0℃-4℃ ≥2 存放樣品和試劑標準物質， 6 冷凍設備 ＜-16℃ ≥2 存放樣品和試劑標準物質， 7 離心機 轉速不低于 5000r/min ≥1 樣品前處理分離， 8 溫度計 分辨率：0.1℃ ≥1 環(huán)境溫度測量， 9 電子溫濕度計 1%-99%；分辨率：0.1% ≥1 環(huán)境濕度測量， 10 樣品均質器 ≥1 粉碎制備樣品 11 振蕩器 振速不低于 300 r/min ≥1 振蕩混合左右， 12 恒溫水浴鍋 0-100℃ ≥1 恒溫水浴加熱， 13 微量移液器 1 20 μL-200 μL ≥1 準確移取體積， 14 微量移液器 2 100 μL-1000 μL ≥1 準確移取體積， 15 微量移液器 3 1 mL-5 mL ≥1 準確移取體積， 16 半定量定氮裝置 ≥1 符合國標測定揮發(fā)性鹽基氮的要求 17 酸式滴定管 0 mL-50 mL，精度±0.1mL ≥1 滴定測量， 18 堿式滴定管 0 mL-50 mL，精度±0.1mL ≥1 滴定測量， 19 電熱干燥箱 0 ℃-300 ℃，精度±1 ℃ ≥1 20 電加熱板/爐 0 ℃-150 ℃，精度±1 ℃ ≥1 21 高壓滅菌器 ≥1 微生物檢測中滅菌 22 顯微鏡 ≥1 旋毛蟲、囊蟲觀察 23 生物安全柜 ≥1 微生物檢測、非洲豬瘟檢測 24 玻璃器皿 若干 容量瓶、移液管、量筒、燒杯、三角瓶等 25 熒光定量 PCR 儀 JN-YGDL2 ≥1 非洲豬瘟檢測 26 肉類水分測定儀 JN-WT ≥1 快速測定肉類水分含量 27 瘦肉精快檢卡 ≥1 快速定性篩查是否含有瘦肉精
（三）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室檢測人員
至少2名檢測人員，負責樣品檢測和結果報告。檢測人員應接受實驗室檢測技術及生物安全相關知識培訓，熟悉分子生物學檢測。
二、屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室操作規(guī)范
（一）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品采集
駐場獸醫(yī)負責樣品采集，并填好采樣記錄表（見附表1）。樣品為生豬抗凝血（5mL，0.5%EDTA抗凝，不能使用作為抗凝劑）或全血樣品。
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品包裝
樣品包裝須符合《高致病性動物病原微生物菌（毒）或者樣本運輸包裝規(guī)范》要求。
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品保存
在12h內檢測的樣品可暫存于4℃冰箱保存，超過12h不能檢測的樣品則置于-20℃或-70℃冰箱保存。已檢樣品應至少保存6個月，以備復查。
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品運輸
由專人將樣品送至實驗室，必要時安排專車送達，禁止使用公共交通工具。
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品接收、開箱
接到樣品時，首先應檢查外包裝有無損壞，并進行登記，如有破損應立即報告駐場獸醫(yī)。不管外包裝有無損壞，都要在外包裝（冷藏箱或泡沫箱）四周噴灑消毒劑（含2.3%有效氯的次氯酸鹽），作用30 分鐘（為防止噴灑的消毒液干燥，中途再噴灑一次）。開箱后在樣品箱內側充分噴灑消毒劑，翻動冰袋，再次噴灑，保證所有角落和內壁均被噴灑消毒劑。樣品箱的消毒、樣品取出等動作應輕緩，以減少氣溶膠產生。
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品檢測
嚴格按照試劑說明書的操作步驟進行檢測。
熟悉操作，縮短檢測過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞。
所有試劑開蓋前都應先瞬時離心，避免液體飛濺；若液體不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面。
樣品處理、配液、擴增嚴格分區(qū)，儀器、耗材等嚴禁交叉混用。
加樣時嚴禁吹打。
熒光探針應避光保存，反應液現(xiàn)配現(xiàn)用，加入核酸后應盡快上機。
不要在熒光定量PCR管蓋的采光部位做任何標記，不能用手接觸PCR管
蓋上的采光部位。
原始記錄
實驗完成后應填寫并保存相關檢測原始記錄（見附表2），檢測原始記錄、PCR圖至少保存5年。
屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室檢測報告
根據《關于全面開展生豬屠宰環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測工作有關具體要求的通知》（川動監(jiān)[2019]5號）要求，屠宰企業(yè)檢測結果應規(guī)范出具《檢測報告》（見附表3），載明對應的檢疫合格證明編號、檢測方法、檢測日期、檢測結果。檢測報告必須經由報告編制人、駐場獸醫(yī)和批準人（場點負責人）簽字確認，加蓋屠宰企業(yè)公章方為有效。檢測報告一式兩份，一份交企業(yè)所在縣（市、區(qū)）動物疫病預防控制中心存檔，一份為屠宰企業(yè)自行留存，保存期至少5年。
（九）結果處理
1、檢測結果為陰性，同批生豬產品上市銷售。
2、檢測結果為陽性，應立即停止生產，將檢測結果報告駐場獸醫(yī)，并及時將陽性樣品送所在縣級動物疫病預防控制中心，待復核后再做處理。復核為陽性的按照《非洲豬瘟疫情應急實施方案（2019年版）》的規(guī)定采取應急處置措施處理。
三、屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室生物安全要求
（一）采樣生物安全
1、正確穿戴好口罩、手套、鞋套、實驗服等個人防護用品。
2、盡可能使用物理設備保定動物，既保證人的安全，又保證樣品質量。
3、一頭豬一個注射器或一個真空，避免樣品交叉污染。
4、采樣結束，采樣人員脫去個人防護用品，并對采樣環(huán)境清潔消毒。
（二）檢測過程中的生物安全
1、檢查樣品外包裝有無損壞，并對外包裝進行消毒。
2、注射器使用完后必須放置于專用廢棄盒中待高壓滅菌處理，高壓滅菌前不得拆卸針頭和注射器。
3、盡量使用帶濾芯的移液器吸頭，不用移液器混勻液體。
4、對于管壁上沾有懸液的離心管，應短暫離心后再打開管蓋。
5、核酸提取完成后應在更換手套后再進行配液。
6、配液區(qū)和核酸提取區(qū)嚴格分開，儀器、耗材等嚴禁交叉混用。
（三）檢測后實驗室消毒
1、實驗室臺面、桌椅、櫥柜、門把手、水龍頭等物品的表面可用有效氯濃度為0.1%-0.5%的消毒劑噴灑，作用30min后用清水擦拭。
2、實驗室地面可用有效氯濃度為0.1%-0.5%的消毒劑噴霧或拖地，各實驗室拖把應專用，不得混用。
3、廢液缸、剪刀、鑷子等可回收物，用消毒液浸泡30min后用清水清洗，可高溫滅菌的用牛皮紙等包好后高壓（121℃，20min）滅菌備用。
4、實驗服等可重復利用的棉織制品，可經121℃、20min高壓滅菌、清洗后使用，也可用氯化物、酚化物等消毒劑浸泡30min，清水清洗后晾干備用。
5、儀器設備：組織勻漿儀、離心機、PCR儀等設備的金屬部件使用75%乙醇擦拭消毒，非金屬部件可使用含2.3%有效氯的次氯酸鹽消毒30min，然后清水洗凈或擦拭。
（四）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室廢棄物處理
1、以下廢棄物需進行高壓滅菌處理：（1）超過留存期的所有樣品；（2）使用后的槍頭、EP管、等；（3）一次性個人防護用品，如口罩、手套、鞋套等；（4）注射器針頭等銳器使用后應直接棄置于耐高壓、防穿透的容器內。將上述廢棄物放入醫(yī)療廢物袋，并在廢物袋的中心位置放置高壓指示帶或化學指示卡，袋口應稍微扎口（不能太緊），袋口和外表面噴灑消毒劑，121℃高壓蒸汽處理20分鐘，然后將滅菌后的廢棄物存放在冰柜中，定期交由有資質的無害化處理公司進行無害化處理。
2、使用后的PCR反應管（內含反應產物）直接棄置于醫(yī)療廢物袋中，禁止開蓋（以免造成氣溶膠污染），交由無害化公司處理或者焚燒處理。
